Главная • Урология • Андрология • Тесты на антиспермальные антитела, как проводятся

Тесты на антиспермальные антитела, как проводятся

Какие тесты следует использовать для определения антиспермальных антител?

Единственные надежные тесты на антиспермальные антитела - это те, с помощью которых учитывают присоединение антител к поверхности живого подвижного сперматозоида.

Использование нежизнеспособной спермы для тестирования недопустимо, так как антитела прилипают неспецифически к ней, давая ложноположительные результаты.

Как дифференцировать различные тесты для определения антиспермальных антител? Из тестов на антиспермальные антитела интерес представляют только те, которые позволяют определить связывание антител с поверхностью живых подвижных сперматозоидов.

Анализ связывания иммуноглобулинов

Анализ связывания иммуноглобулинов осуществляют при помощи шариков, покрытых антителами против разных изотипов иммуноглобулинов - IgG, IgA и IgM.

Антитела в сперматозоидах

С целью определения антител в эякулированных сперматозоидах свежий образец спермы несколько раз отмывают для удаления семенной жидкости и затем инкубируют сперматозоиды с разными шариками, покрытыми антителами. Антитела на шариках связываются с антиспермальными антителами на сперматозоидах. Спустя несколько минут образец помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом. 100 подвижных сперматозоидов проверяются на наличие шариков, которые связаны с поверхностью их головки, среднего отдела или хвоста. Отмечают количество подвижных сперматозоидов с шариком, приходящиеся на каждый изотип антител, и участок связывания на каждом сперматозоиде.

Антиспермальные антитела в сыворотке

Для определения антиспермальных антител в сыворотке или цервикальной слизи сперматозоиды от партнера (предпочтительно) или от донора спермы доказанной фертильности, прошедшего обследование на наличие антиспермальных антител на поверхности сперматозоидов, которое показало отрицательные результаты, инкубируют с разведением сыворотки или цервикальной слизи при 37 градусов С в течение 60 мин. Затем сперматозоиды тщательно отмывают для удаления любых несвязанных антител и определяют скопление антител из сыворотки или цервикальной слизи на поверхности сперматозоидов при помощи шариков (bead binding), как описано выше.

MAR тест

Для проведения теста MAR неотмытую свежую сперму смешивают на предметном стекле с эритроцитами барана, покрытыми IgG или IgA. Вместо эритроцитов барана иногда используют латексные частицы. Затем в раствор, рассматриваемый под микроскопом, помещают антитела к человеческим IgG или IgA.

Если на сперматозоидах присутствуют антитела, будут видны эритроциты, адгезированные к сперматозоидам. В итоге, если имеются антиспермальные антитела, будут видны большие агрегаты сперматозоидов.

Тест MAR можно также использовать для определения антител в сыворотке путем инкубации свободных от антител сперматозоидов с сывороткой, как описано для анализа связывания иммуноглобулинов, а затем проверки на наличие сперматозоидов, связанных с антителами.

И анализ связывания иммуноглобулинов, и тест MAR могут быть модифицированы для определения антиспермальных антител в цервикальной слизи. Цервикальную слизь вначале необходимо разжижить путем инкубации в бромелине в течение короткого периода. Образец центрифугируют и поверхностный слой исследуют на антиспермальные антитела при помощи косвенного иммуноглобулинового анализа или теста MAR.

С.С.Bиткин

"Тесты на антиспермальные антитела, как проводятся" и другие статьи из раздела Андрология

Читайте также: